Avaliação de três métodos de extração de DNA de material parafinado para amplificação de DNA genômico pela técnica da PCR

Autores

  • Ricardo Alves MESQUITA Universidade de São Paulo; Faculdade de Odontologia
  • Evelyn K. ANZAI Universidade de São Paulo; Faculdade de Odontologia
  • Rogério Nogueira OLIVEIRA Universidade de São Paulo; Faculdade de Odontologia
  • Fábio Daumas NUNES Universidade de São Paulo; Faculdade de Odontologia

DOI:

https://doi.org/10.1590/S1517-74912001000400008

Palavras-chave:

DNA, Reação em cadeia por polimerase, Queratina

Resumo

Existem na literatura vários protocolos para extração de DNA genômico a partir de material fixado em formol e embebido em parafina. A obtenção de DNA genômico é importante para realização de experimentos em biologia molecular, dentre eles a PCR. Este trabalho teve por objetivo otimizar a extração de DNA genômico a partir de material fixado (hiperplasia fibrosa inflamatória) e não-fixado (mucosa bucal normal) em formol, comparando-se três metodologias diferentes: fenol com digestão enzimática, partículas de sílica com e sem digestão enzimática. Para amplificação do DNA pela técnica da PCR, utilizou-se iniciadores para o éxon 7 da citoqueratina humana tipo 14. O sucesso da amplificação foi verificado pela eletroforese do produto em gel de poliacrilamida 8% contendo glicerol 5% corado com prata. Obteve-se amplificação do DNA genômico extraído com fenol/digestão enzimática e com partículas de sílica/digestão enzimática, para ambos tecidos utilizados. O método padronizado tem potencial para auxiliar no diagnóstico histopatológico, assim como no estudo retrospectivo de material de arquivo.

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Publicado

2001-12-01

Edição

Seção

Patologia

Como Citar

Avaliação de três métodos de extração de DNA de material parafinado para amplificação de DNA genômico pela técnica da PCR. (2001). Pesquisa Odontológica Brasileira, 15(4), 314-318. https://doi.org/10.1590/S1517-74912001000400008