Method development and validation for naratriptan determination in human plasma by HPLC with tandem mass spectrometry detection, and its application to bioequivalence study

Resumo

Os autores desenvolveram um método simples, sensível e específico de cromatografia líquida-espectrometria de massa-tandem (LC-MS/MS) para a quantificação de naratriptan (NP) em plasma humano empregando naratriptan-d3 (NPD3) como padrão interno de referência (IS). A separação cromatográfica foi realizada em coluna Zorbax SB-C18, 75 x 4,6 mm, 3,5 μm com fase móvel isocrática composta por 0,1% ácido fórmico : acetronitrila (50:50 v/v) e taxa de fluxo de 0,6 mL/min. NP e NPD3 foram detectados com adutos de prótons a m/z 336.5→98.0 e 339.4→101.0 in em modo positivo do tipo monitoramento de reação selecionada (SRM), respectivamente. Extração líquido-líquido foi empregada para extrair NP e NPD3, sendo o método validado para uma faixa linear de concentração de 0,1-25,0 ng/mL resultando em coeficiente de correlação (r2) >; 0,9998. A variação intra e interdia observada para precisão foi de 1,8 a 3,6% e 2,3 a 2,6%, respectivamente; para exatidão a variação foi de 101,7 a 104,2% e 101,8 a 102,9%, respectivamente. O NP se mostrou estável frente a processos de congelamento-descongelamento (3 ciclos), e estudos de estabilidade de bancada e amostragem automática. O método desenvolvido foi aplicado com sucesso para a análise de amostras de plasma após a administração oral de 2,5 mg de NP em 31 voluntários humanos, de nacionalidade indiana, sexo masculino, sob condições aceleradas.