Adaptação de linhagem celular bovina de forma otimizada para diagnóstico de Lentivirus capartenc

Resumo

A caprinocultura é uma importante atividade econômica para a região semiárida do nordeste do Brasil, e uma doença infecciosa que afeta significativamente a caprinocultura leiteira é o Lentivirus capartenc, anteriormente conhecido como Vírus da Artrite Encefalite Caprina (CAEV). O objetivo desta pesquisa foi avaliar a eficiência e especificidade de um teste de imunodifusão em gel de ágar (IDGA) com antígenos de CAEV produzidos por meio de células bovinas não tratadas e tratadas com detergente e compará-lo com o teste comercial CAE-IDGA -Biovetech®. A cultura de células primárias de orelha bovina (CFBov) foi crescida a uma concentração de 4x104 células/mL e incubada a 37°C. Para avaliação dos tratamentos das células bovinas, foram utilizadas 270 amostras de soro caprino de rebanhos do estado de Pernambuco e testados contra 30μL de cada detergente para o possível diagnóstico de Lentivirus capartenc. Para produção de partículas virais, os CFBov foram inoculados com 0,5mL de amostra viral CAEV Cork com título de 10-4,5 por 30 minutos. Após 30 minutos de adsorção foi realizada suplementação com DMEM contendo 2% de Soro Fetal Bovino (FBS). O sobrenadante das culturas foi coletado, congelado e, posteriormente submetido à concentração de antígeno utilizando PEG 6.000. Posteriormente, o concentrado foi submetido ao tratamento com os seguintes detergentes: Triton X-100 0,1%, SDS 0,1%, Tween 20 0,1%. Os antígenos foram avaliados pela produção de linhagens específicas na Técnica de Imunodifusão em Gel de Agar (IDGA). O soro positivo do kit de diagnóstico para Lentivirus capartenc (IDGA) foi utilizado como controle. Os resultados avaliados foram sensibilidade de 94,7% e especificidade de 99,6% para antígeno puro; sensibilidade de 97,4% e especificidade de 98,7% para SDS; sensibilidade de 97,2% e especificidade de 98,7% para Triton X-100; e 97,3% de sensibilidade e 99,1% de especificidade para Tween 20. CFBov foi cultivada por mais de 3 anos, por mais de 40 passagens, sem nenhuma alteração perceptível na morfologia ou na taxa de multiplicação celular. O estudo mostrou que a utilização do tratamento em células bovinas com SDS, Triton 100 e Tween 20 melhorou a sensibilidade e eficiência do teste para detecção de Lentivirus capartenc.