Protocolo de "nested" PCR baseado na fração 16S do rDNA para detecção de Campylobacter gracilis em infecções orais

Resumo

O objetivo deste estudo foi descrever um método de "nested" PCR baseado na fração 16S do rDNA para investigar a ocorrência de Campylobacter gracilis em infecções orais. Amostras foram coletadas de dez casos de canais radiculares infectados, dez casos de abscesso perirradicular agudo e oito casos de periodontite do adulto. O DNA extraído das amostras foi inicialmente amplificado usando "primers" universais para o gene do 16S rDNA. Uma segunda etapa de amplificação empregou os produtos de PCR gerados na primeira reação para detectar C. gracilis usando "primers" desenhados a partir de uma região específica para essa espécie localizada no gene do 16S rDNA. O método usado neste estudo apresentou um limite de detecção de 10 células de C. gracilis e ausência de reatividade cruzada com outras espécies bacterianas orais. C. gracilis foi detectado nos três tipos de infecções orais investigadas - 4/10 canais radiculares infectados; 2/10 casos de abscesso perirradicular agudo; e 1/8 espécimes subgengivais de casos de periodontite do adulto. O método proposto neste estudo foi altamente sensível e específico na detecção direta de C. gracilis em amostras clínicas de infecções endodônticas, abscessos e placa subgengival. Nossos achados confirmam que C. gracilis pode ser um membro da microbiota associada com infecções orais distintas e seu papel específico em tais doenças requer posterior elucidação.