Identificação simultânea de antígenos internos e de superfície de Trypanosoma cruzi reativos para diferentes classes de imunoglobulinas (radio-immunoblotting)

Resumen

Classes e subclasses de anticorpos apresentam diferentes funções, influenciando a resposta imune humoral de um hospedeiro, frente a um agente infeccioso. Na maioria dos sistemas, o alvo principal é representado pelos antígenos de membrana do parasita. Entretanto, a identificação de antígenos de superfície de parasitas, reativos para classe (e subclasse) de imunoglobulinas que não se ligam a proteína-A implica em imunoprecipitações sucessivas, que levam a perda de antígenos e/ou reações inespecíficas. Visando esse estudo, foi desenvolvida uma técnica denominada "radio-immunoblotting", através da qual a reatividade de imunoglobulinas de diferentes classes para antígenos de membrana (e/ou internos) foi analisada simultaneamente. O método constitui na marcação prévia da superfície dos parasitas por radioiodação, fracionamento dos polipeptídeos por SDS/PA-GE, transferência das frações para nitrocelulose, reação com soros e conjugados anti-Igs - peroxidase e autoradiografia dos mesmos, a análise é feita comparando-se os antígenos comuns evidenciados na autoradiografia e nas tiras de nitrocelulose coradas com o substrato da peroxidase. Essa técnica foi utilizada para analisar antígenos de superfície de formas tripomastigotas de T. cruzi reativas para IgG, IgM e IgA provenientes de soros de pacientes com doença de Chagas na fase aguda. Obtiveram-se distintos padrões de reatividade para as diferentes classes de anticorpos provenientes de um mesmo soro humano.