Caracterização e otimização do líquido vesicular de Echinococcus granulosus bovino para utilização no imunodiagnóstico da hidatidose por ELISA

Resumen

O objetivo do presente trabalho foi testar a composição química do líquido hidático bovino (BHCF) obtido de cistos hidáticos férteis (FC) e não férteis (NFC). Oito lotes de FC e 5 de NFC foram preparados e testados quanto à composição química, proteínas totais, proteínas derivadas do hospedeiro, conteúdo de carbohidratos e lipídeos. Não foram observadas diferenças entre os dois primeiros parâmetros sendo que o conteúdo de carbohidratos e lipídeos foi maior nos lotes FC do que nos NFC. Por SDS-PAGE foram observadas bandas de 38 e 116 kD somente nos BHCF do FC. Foram preparados dois «pools» de BHCF, um de FC (PFC) e outro de NFC (PNFC). Os padrões de reconhecimento dos antígenos foram analisados por imunoblot. As condições físico-químicas para adsorção dos antígenos na superfície das placas de poliestireno (ELISA plates) foram otimizadas. O valor de diagnóstico de ambos tipos de BHCF bem como a importância diagnóstica da oxidação das moléculas de carbohidratos com periodato foram analisadas por ELISA usando 42 amostras de soro de pacientes com hidatidose, 41 de pacientes com outras doenças e 15 de doadores aparentemente saudáveis. A reatividade de todos soros contra antígenos nativos foi analisada com e sem fosforilcolina livre. A melhor eficiência diagnóstica foi observada usando BHCF de PFC tratado com periodato usando tampão glicina com forte força iônica para sensibilizar as placas de ELISA.