Efeitos das etapas de tratamento e processamento do tecido na PCR para detecção de Mycobacterium tuberculosis em amostras fixadas em formalina e incluídas em parafina

Resumen

O desenvolvimento e a padronização de métodos confiáveis para a detecção de Mycobacterium tuberculosis em amostras clínicas é um objetivo importante nos laboratórios de todo o mundo. Neste trabalho, fragmentos de pulmão e baço de paciente que morreu com o diagnóstico de tuberculose miliar foram usados para avaliar a influência do tipo de fixador e dos protocolos de fixação e inclusão em parafina na performance da PCR. Fragmentos de tecido foram fixados por quatro h a 48 h, usando formalina não tamponada a 10% ou formalina tamponada a 10% e incluídos em parafina pura ou misturada a cera de abelha. As amostras foram submetidas a PCR para amplificação do gene da beta-actina humana e, separadamente, para amplificação da sequência de inserção IS6110, específica do complexo M. tuberculosis. O resultado da amplificação do gene da beta-actina foi positivo em todas as amostras. Não foram gerados amplicons na PCR-IS6110 em amostras de tecido pulmonar fixadas usando formalina não tamponada a 10% e incluídas em parafina com cera de abelha. Em conclusão, fatores inibitórios combinados interferiram na detecção de M. tuberculosis em material de arquivo. É importante controlar estes fatores inibitórios para poder implementar o diagnóstico molecular em laboratórios de patologia.