Ensaio quantitativo em tempo real para o DNA do vírus da hepatite B (HBV) desenvolvido para detectar todos os genótipos do HBV

Resumo

O vírus da Hepatite B (HBV) é uma das principais causas de doença crônica do fígado no mundo. Além do genótipo, a análise quantitativa do HBV é amplamente utilizada para monitorar a progressão da doença e o tratamento. Em locais com recursos escassos, métodos baratos para o monitoramento da carga viral são desejáveis e, em países em desenvolvimento, sua utilidade já foi demonstrada para outros vírus, como o da Hepatite C e HIV. Neste trabalho, descrevemos a validação de um teste de PCR em Tempo Real para a quantificação do DNA do HBV utilizando sondas Taqman/MGB. Os oligos e sondas foram escolhidos usando um alinhamento contendo seqüências de todos os genótipos do HBV para garantir uma amplificação igual de todos eles. O teste possui um controle interno e foi padronizado com um painel internacional de HBV. Sua eficácia foi testada comparando-se os resultados com outros dois métodos: Versant HBV DNA Assay 3.0 (bDNA, Siemens, NY, USA) e outro PCR em tempo real realizado em um laboratório de referência. As reprodutibilidades intra e inter-ensaio foram determinadas e a média dos valores de CV obtidos foram de 0,12 e 0,09, respectivamente. O teste foi validado com uma ampla faixa dinâmica e amplificou com eficiência os diferentes genótipos de HBV, fornecendo uma boa opção para a quantificação de rotina do DNA do HBV, com um protocolo barato e confiável.