Clonagem e expressão da celulase Xf-818 de Xylella Fastidiosa em Escherichia Coli
DOI:
https://doi.org/10.1590/S0103-90162003000400016Palavras-chave:
clorose variegada dos citros, celulases, clonagem e expressãoResumo
Xylella fastidiosa foi a primeira bactéria fitopatogênica que teve seu genoma completamente seqüenciado. A identificação de diversos genes, através de similaridade de seqüências, indicou os possíveis mecanismos de patogenicidade da bactéria. Entretanto, a determinação da função de um gene requer a confirmação experimental e, neste aspecto, a expressão heteróloga é uma poderosa ferramenta. X. fastidiosa coloniza somente o xilema das plantas hospedeiras e a identificação putativa de diversos genes semelhantes a enzimas que degradam a parede celular vegetal, estimularam o presente estudo de catacterização destas enzimas. A clonagem da ORF Xf-818 de X. fastidiosa no vetor de expressão pET20b possibilitou a produção da proteína heterologamente em E. coli. O emprego de IPTG a 0,4 mmol L-1 com 12 h a 32°C, possibilitou as melhores condições para E. coli produzir a proteína heteróloga. Clones de E. coli que expressam Xf-818, apresentam atividade celulásica, degradando eficientemente a celulose. A identificação de Xf-818 como uma endoglicanase foi assim confirmada.Downloads
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Publicado
2003-12-01
Edição
Seção
Fisiologia e Bioquímica de Plantas
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Clonagem e expressão da celulase Xf-818 de Xylella Fastidiosa em Escherichia Coli . (2003). Scientia Agricola, 60(4), 715-721. https://doi.org/10.1590/S0103-90162003000400016