Sexagem de embriões bovinos fecundados in vitro pela técnica de PCR multiplex
DOI:
https://doi.org/10.1590/S1413-95962000000600006Palavras-chave:
Sexagem, Embrido, Bovino, PCRResumo
Neste trabalho, a técnica de PCR ("polymerase chain reaction") foi utilizada para a sexagem de 92 embriões bovinos fertilizados in vitro. Os embriões originaram-se de fertilização in vitro de oócitos aspirados de ovários de fêmeas bovinas, provenientes de abatedouros comerciais. Os oócitos foram maturados, fertilizados e cultivados até o estádio de blastocisto. Os embriões foram lavados em solução de PBS, transferidos para tubos de polipropileno contendo água ultrapura, e imediatamente congelados a -196ºC. Os embriões foram descongelados sobre isopor contendo gelo picado e tratados com proteinase K. Para a reação de PCR, utilizaram-se alíquotas de 34 µl de cada tudo, onde foram acrescidos dois pares de primers, seqüência BC1.2 e seqüência satélite 1.715, desoxinucleotídeos, MgCl2, tampão PCR 10X, TaqDNA polimerase e água, em um volume final de 50 µl. As amostras foram amplificadas e a eletroforese realizada em gel de poliacrilamida a 8%. Os géis foram corados com solução de brometo de etídio e analisados em transiluminador de luz ultravioleta. Um índice de 93,47% de amplificação foi atingido, com 41 embriões (47,67%) machos e 45 (52,32%) embriões fêmeas. O uso de gel de poliacrilamida a 8% foi eficaz na separação de fragmentos de DNA muito próximos.Downloads
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Publicado
2000-12-01
Edição
Seção
MEDICINA VETERINÁRIA
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Como Citar
1.
Luz MR, Watanabe YF, Ferro JA, Ferro MIT, Mauro SMS de, Hossepian de Lima VFM, et al. Sexagem de embriões bovinos fecundados in vitro pela técnica de PCR multiplex. Braz. J. Vet. Res. Anim. Sci. [Internet]. 1º de dezembro de 2000 [citado 11º de maio de 2024];37(6):453-6. Disponível em: https://revistas.usp.br/bjvras/article/view/5861